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苏木精-伊红染色的技术要点
发布时间:2019-05-10 09:07:39| 浏览次数:

苏木精-伊红染色的技术要点

   苏木精-伊红染色(Hematoxylin-Eosin staining,HE染色)是形态学最基本有效的方法, 借助光学显微镜可以清楚了解组织细胞的基本结构和病理改变,与免疫组化学,原位杂交染色等结合,可以直观掌握组织细胞的发育、病变等情况、为后续的功能和机制研究奠定基础。

1、技术原理

苏木精是一种碱性染料,使细胞组分中的酸性物质如细胞核染色体、细胞质中粗面内质网等细胞器呈现“蓝紫色”;伊红是一种酸性染料,使细胞组分中碱性物质,如细胞质大多数蛋白质、红细胞血红蛋白和细胞外基质等物质呈现“红色”;因此,HE染色能够显示各种组织细胞的基本结构与病理改变,是组织病理形态研究中最基本、使用最广泛的技术方法。

2、基本流程


3、技术要点

1)组织取材:做到“快、准、小”,快速取材,保证新鲜;部位准确,必要时可借助解剖显微镜,剪切边缘整齐,避免组织内部的机械损伤,保证组织完整。组织不能太大,不宜超过1cm3

2)固定:快速、充分。根据不同组织的特性,选择有效的固定液(非常重要),最常用的4%多聚甲醛。取材后应立即浸入固定液,待组织变硬,进行修块,继续固定充分;固定时间应根据组织和固定液特性调整。

3)组织脱水:低浓度酒精脱水,时间宜长;高浓度酒精脱水时间宜短,时间太长,组织容易变脆;

4)组织透明:大多数组织先用香柏油透明24h,然后再用二甲苯置换香柏油,二甲苯时间不宜过长,一般2h以内。

5)包埋:包面前的浸蜡是比较重要的步骤,可先在1:1的二甲苯和石蜡中1h,再用石蜡浸泡1h。无论是浸蜡还是包埋,要注意石蜡的温度控制,温度不宜太高,组织块的温度与石蜡温度应保持一致。包埋时,组织块可以在酒精灯上稍作加热,使组织块温度稍高。包埋动作要快,防止石蜡温度降低凝固。

6)切片:切片前石蜡包埋块应进行修整,组织外围的石蜡不要太少;实验室温度不宜太高,石蜡块可以在4℃冰箱预冷或者置于冰上片刻,不宜使用-20℃以下冷冻。切片时要固定好石蜡块,调整刀的角度,用力均匀,切片厚度5um左右。切好的石蜡条,在45℃的温水中展开进行贴片。载玻片应事先处理干净,否则会影响观察和长久保存。

7)染色:染色前的组织脱蜡不完全影响着色效果。苏木精染色约3min,伊红染色约5min,苏木精染色后的分色是比较重要的,但时间不宜过长,2-3sec即可,分色后细胞核着色为紫红色,需要用碱性水返蓝或者用自来水冲洗直至为蓝紫色。整个染色过程需要借助显微镜实时观察,以调整染色时间达到理想的染色效果。伊红染色前切片可以先在37℃烤干,再进入95%酒精脱水,染色完成进行脱水透明。

            

8)封片观察:染色完成后脱水要彻底,才能用二甲苯透明,如果脱水不彻底,封片后在显微镜高倍镜下组织细胞会模糊不清,影响观察和照片效果。封片剂一般用中性树胶,载玻片要清洗干净,封片时要防止气泡余留。
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